收藏我们 在线订购

产品选择指南

技术服务信息

机构用户解决方案

当前位置:首页> 技术服务信息 > DNA/RNA合成服务 > 不同纯化级别制品的选择指导 > 不同纯化级别制品的选择指导
不同纯化级别制品的选择指导

DNA合成时,每个碱基依次偶联到增长中的链上。每一个循环都会有一个小比例的Oligos链不能被延伸,合成产物是一个由目的序列与失败序列组成的混合物。随着Oligos长度的增加,失败序列的相对比例在增大。
Oligos从支持体上切下后,需要首先脱去碱基上的保护基,之后进行精制将失败序列从全长序列中分离出去。需要的Oligos纯度水平取决于失败序列的存在是否会对实验造成影响。有些应用只允许目的序列存在,而对于有些应用,较短序列存在(n-1,n-2…)不会影响实验结果。
 
本公司提供以下级别的制品
OPC纯化:
OPC纯化利用装有C18树脂的Cartridge小柱纯化制品,分离的基础是依据全长序列(带有DMT基团)与失败序列(没有DMT基团)疏水性的差别。本纯化方法提供的纯度水平,通常为85-95%。
对于大多数分辨率要求比较高的应用,OPC纯化提供了必要纯度水平的制品。纯化后的制品可用于测序、克隆、PCR、突变等。
PAGE纯化:
PAGE纯化分离依据的是分子量与电荷。在电场作用下,不同长度序列迁移的速率不同。
将Oligo DNA/RNA粗制品上样到聚丙烯酰胺凝胶板上,采用适宜的凝胶浓度电泳,回收目的带进行精制。
目的序列较短时,N-1失败序列会被有效去除;序列更长(>60 mer)时,PAGE是非常好的纯化方式。由于具有很高的分辨率,PAGE纯化提供的制品纯度接近于离子交换HPLC。
反相HPLC纯化:
依据的原理同OPC纯化,根据被分离物质疏水性的不同,将不同长度的、或将带有修饰基团与不带修饰基团的Oligos分离开来。
反相HPLC在纯化带有疏水性修饰基团的目的序列与不带修饰基团的失败序列时,是非常有效的纯化方法;但分离N-1失败序列的能力较差,远不如离子交换HPLC的分辨能力。
离子交换HPLC纯化:
根据分子所带负电荷的多少,利用梯度洗脱,将目的序列与失败序列分离开来。离子交换HPLC的分辨率非常高,能分离掉N-1失败序列,得到高纯度的产品(大于95%)。本公司对<38mer的HPLC级引物采用离子交换HPLC纯化,如果订购的引物序列特殊,本公司会根据实际情况选择合适的纯化方式,PAGE、HPLC、或双次纯化,此时本公司将不再通知客户。
HPLC+PAGE纯化:
Oligos先经过HPLC纯化,再经过PAGE纯化,利用两种不同的分离原理纯化过的Oligos具有非常高的纯度。本公司对>38 mer的普通DNA采用HPLC+PAGE双重纯化,按HPLC标准收费。对于≤38 mer的普通DNA如需双重纯化,需要特殊说明,而且会加收一定费用,请咨询。
 
此外要补充说明的是,以上所述各级别制品的纯度会随着Oligo长度及序列组成的不同而发生改变,Oligo长度增加、序列特殊(形成高级结构等),制品的纯度会有所降低。