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用Universal Buffer和Basal Buffer进行限制酶活性表示

Takara公司为了方便限制酶的统一使用,采用了通用缓冲液 (Universal Buffer) 测定限制酶活性的
体系(5种通用缓冲液中,
 
标注的),以此时的活性值作为100%。并把在其它通用缓冲液中的
相对活性表示如下表。有 ( ) 标记的是易受Star活性影响的缓冲液,为了避免Star活性的影响,希望
尽量使用
 
标注的缓冲液。每种限制酶都有其自身的基本缓冲液(Basal Buffer),其中
Acc BalBcn、BglⅠ、Bpu1102Ⅰ、Cfr10Ⅰ、Eam1105Ⅰ、Eco52Ⅰ、NruⅠ、PshBⅠ、SnaBⅠ、SspⅠ、TaqⅠ、VpaK11B Ⅰ(共14种)由于没有十分合适的通用缓冲液,只能使用基本缓冲液(Basal Buffer)。各种限制酶的基本缓冲液组成不同,相互之间不能通用。各种限制酶在基本缓冲液中的相对活性也被列于下表,供参考。
 
限制酶在各种缓冲液中的相对活性
 
 
 
附带·活性测定用Buffer    推荐使用的Buffer
限制酶 相对活性(%)
L M H K T+BSA Basal*1
  Aat II <20 <20 <20 <20 100 120
  Acc I 20 100 <20 (<20) 160 80
  Acc II (260) 100 <20 20 200 160
  Acc III (<20) (<20) 20 (80) (<20) 100
  Afa I 60 60 40 60 100 100
  Afl II 20 40*2 <20 <20 140 120
  Alu I 100 100 <20 40 200 120
  Aor13H I <20 20 <20 80*1 80 100
  Aor51H I 80 100 <20 20 120 120
  Apa I 100 <20 <20 <20 <20 120
  ApaL I 100 20 <20 <20 120 120
  Bal I 10 10 <10 <10 <10 100
  BamH I (40)

(60)

80 100 60 160
  Ban II (120) (120) 100 80 (100) 100
  BciT130 I (<20) (20) 80 100 (20) 100
  Bcn I <20 20 40 60 60 100
  Bgl I <20 <20 20 40 <20 100
  Bgl II <20 20 100 (100) (60) 100
  Bln I <20 20 40 100 20 120
  BmeT110 I <20 <20 20 100 <20 140
  BmgT120 I <20 <20 100 40 <20 240
  Bpu1102 I <20 <20 <20 40 60 100
  BspT104 I 100 60 <20 <20 100 100
  BspT107 I <20 20 80 100 20 100
  Bsp1286 I 100 20 <20 <20 60 100
  Bsp1407 I 20 60 20 20 100 100
  BssH II 100 100 60 20 140 100
  BstP I (<20) (60) 100 (100) (100) 100
  BstX I <20 40 100 <20 <20 120
  Bst1107 I (<20) 60 100 100 40 100
  Cfr10 I (<20) (<20) (<20) 40 (20) 100
  Cla I 40 100 60 100 60 100
  Cpo I <20 <20 80 100 <20 100
  Dde I 40 60 60 100 80 100
  Dpn I 60 60 120 140 100*3 100
  Dra I 100 100 60 100 80 80
  Eae I 60 100 <20 <20 120 160
  Eam1105 I (<20) (40) 20 40 (40) 100
  EcoO65 I (20) (60) 60*1 40 40 100
  EcoO109I 100 60 <20 <20 100 160
  EcoRI (20) (100) 100 (120) (80) 120
  EcoRV (<20) (40) 100 (120) (40) 100
  EcoT14I (<20) (40) 100 120 (60) 100
  EcoT22I <20 20 100 (140) (20) 120
  Eco52I <20 <20 <20 <20 <20 100
  Eco81I <20 100 <20 <20 100 160
  Fba I (<20) (<20) (80) 100 (20) 100
  Fok I (20) (60)*1 <20 <20 (200) 100
  Hae II 80 100 <20 30 (200) 100
 
限制酶 相对活性(%)
L M H K T+BSA Basal*1
  Hae III 60 100 100 60 100 100
  Hap II 100 60 <20 <20 100 80
  Hha I 80 100 150 >300 150 80
  Hinc II 20 100 20 40 >240 100
  Hind III (60) 100 <10 40 (100) 80
  Hinf I 80 100 100 160 60 100
  Hin1 I 40 80*1 <20 20 60 160
  Hpa I <20 (40) 20 100 (80) 100
  Kpn I 100 60 <20 <20 (100) 80
  Mbo I 20 40 60 100 40 100
  Mbo II 100 60 <20 <20 60 100
  Mfl I 100 80 <20 <20 80 100
  Mlu I 60 60 100 (100) 60 100
  Msp I 40 40 <20 40 100 60
  Mun I (200) 100*1 <20 <20 160 100
  Nae I 100 <20 <20 <20 100 120
  Nco I (40) (60) 20 20*1 (60) 240
  Nde I <20 40 100 100 80 100
  Nhe I (120) 100 <20 <20 (160) 100
  Not I (<20) (<20) 100*2 (60) (<20) 60
  Nru I 0 <20 20 20 <20 100
  Nsb I 40 20 <20 60 100 100
  PmaC I 100 80 <20 <20 100 100
  PshA I 20 40 <20 100 60 160
  PshB I (20) (40) 20 40 40 100
  Psp1406 I 20 60 <20 <20 100 100
  Pst I (<20) (60) 100 80 (20) 80
  Pvu I (<20) (20) (40) 80*1 (40) 120
  Pvu II (80) 100 40 <20 (40) 100
  RspRS II 80 100 100 100 100 100
  Sac I 100 60 <20 <20 80 80
  Sac II 40 20 <20 <20 100 40
  Sal I <20 <20 100 (20) <20 200
  Sau3A I (60) 80 100 <20 (80) 100
  Sca I (<20) (<20) 100 (60) (<20) 100
  Sfi I (40) 100 <20 <20 100 100
  Sma I <20 <20 <20 <20 100 100
  Smi I <10 <20 100 40 <10 100
  SnaB I (20) (40) <20 <20 (40) 100
  Spe I (80) 100 80 100 (80) 100
  Sph I (20) (40) 100 120 (20) 100
  Sse8387 I (120) 60*1 <20 <20 (60) 100
  Ssp I (<20) (60) 40 (100) (80) 100
  Stu I 60 100 60 80 140 100
  Taq I 20 80 20 60 80 100
  Tth111I (20) 80 40 100 (80) 120
  Van91 I <20 (20) 60 100 (60) 100
  VpaK11B I <20 <20 60 (40) <20 100
  Xba I <10 50*1 <10 <10 120 120
  Xho I <20 40 100 100 30 100
  Xsp I <20 60 <20 100 160 100
 *1 +0.01%BSA→100%: Afl II, Aor13H I, EcoO65 I, Fok I, Hin1 I, Mun I, Nco I, Pvu I, Sse8387 I, Xba I
 *2 +0.01%BSA+0.01%Triton X-100→100%: Not I
 *3 不加BSA
按Universal Buffer分类的限制酶
 
L M H K T+BSA
  Afa I
  Alu I
  Aor51H I
  Apa I
  ApaL I
  Acc I
  Acc II
  Afa I
  Afl II*1
  Alu I
  Ban II
  Bgl II
  BmgT120 I
  BspT107 I
  BssH II
  Afa I
  Aor13H I*1
  BamH I
  Ban II
  BciT130 I
  Aat II
  Acc I
  Acc II
  Afa I
  Afl II
  BspT104 I
  Bsp1286 I
  BssH II
  Dra I
  Eae I
  Aor51H I
  BspT104 I
  Bsp1407 I
  BssH II
  Bst1107 I
  BstP I
  BstX I
  Bst1107 I
  Cla I
  Cpo I
  Bcn I
  Bln I
  BmeT110 I
  BspT107 I
  Bst1107 I
  Alu I
  Aor13H I
  Aor51H I
  ApaL I
  Bcn I
  EcoO109 I
  Hae II
  Hae III
  Hap II
  Hha I
  Cla I
  Dra I
  Eae I
  EcoO109 I
  Eco81 I
  Dra I
  EcoO65 I*1
  EcoR I
  EcoR V
  EcoT14 I
  Cla I
  Cpo I
  Dde I
  Dra I
  EcoT14 I
  Bpu1102 I
  BspT104 I
  Bsp1286 I
  Bsp1407 I
  BssH II
  Hinf I
  Kpn I
  Mbo II
  Mfl I
  Mlu I
  Fok I*1
  Hae II
  Hae III
  Hap II
  Hha I
  EcoT22 I
  Hae III

  Hha I
  Hinf I
  Mbo I
  Fba I
  Hae II
  Hae III
  Hha I
  Hind III
  Cla I
  Dra I
  Eae I
  EcoO109 I
  Eco81 I
  Msp I
  Nae
I
  PmaC I
  Sac I
  Stu I
  Hinc II
  Hind III
  Hinf I
  Hin1 I*1
  Kpn I
  Mlu I
  Nde I
  Not I*2
  Pst I
  Sal I
  Hinf I
  Hpa I
  Mbo I
  Msp I
  Nco I*1
  Hae II
  Hae III
  Hap II
  Hha I
  Hinc II
            Mbo II
  Mfl I
  Mlu I
  Msp I
  Mun I*1
  Sau3A I
  Sca I
  Smi I
  Spe I
  Sph I
  Nde I
  Nsb I
  PshA I
  Pst I
  Pvu I*1
  Hinf I
  Hin1 I
  Mbo II
  Mfl I
  Mlu I
  Nhe I
  PmaC I
  Psp1406 I
  Pvu II
  Sca I
  Stu I
  Taq I
  Van91 I
  VpaK11B I
  Xho I
  Spe I
  Sph I
  Stu I
  Taq I
  Tth111 I
  Msp I
  Mun I

  Nae I
  Nde I
  Nsb I
  Sau3A I
  Sfi I
  Spe I
  Sse8387 I*1
  Stu I
    Van91 I
  Xho I
  Xsp I
  
  
   
  PmaC I
  PshA I
  Psp1406 I
  RspRS II
  Sac I
  Taq I
  Tth111 I
  Xba I*1
  Xho I
  Xsp I
  Sac II
  Sfi I
  Sma I
  Stu I
  Taq I
  Xba I
  Xho I
  Xsp I
*1+0.01%BSA      *2+0.01%BSA+0.01%Triton X-100
 
各Universal Buffer的组成
 

    1.10×L 100 mM
100 mM
10 mM
  Tris-HCI (pH7.5 )
MgCl2
Dithiothreitol

    2.10×M 100 mM
100 mM
10 mM
500 mM
  Tris-HCI (pH7.5 )
MgCl2
Dithiothreitol
NaCl

    3.10×H 500 mM
100 mM
10 mM
1,000 mM
  Tris-HCI (pH7.5 )
MgCl2
Dithiothreitol
NaCl

    4.10×K 200 mM
100 mM
10 mM
1,000 mM
  Tris-HCI (pH8.5 )
MgCl2
Dithiothreitol
KCl

    5.10×T
        (BSA-free)
330 mM
100 mM
5 mM
660 mM
  Tris-acetate (pH7.9 )
Mg-acetate
Dithiothreitol
K-acetate

    6.0.1%BSA 1 ml    

    7.0.1%Triton X-100 1ml    

 
■ 使用注意事项
缓冲液添加量为反应液的1/10。此外,10×T溶液中不含BSA, 在使用时将BSA添加BSA,使其最终浓度为0.01%,有些限制酶(带有*1*2标记)的反应体系中酶附带的BSA或Triton X-100是10倍浓度 (0.1%) 的液体,使用时请在反应体系中添加1/10量进行反应。
 
■ 保存
-20℃
 
反应停止液组份表
(10 × Loading Buffer)
0.9%         SDS
50%         Glycerol
0.05%         Bromophenol Blue
 
■ 使用方法
本公司的常规限制酶包装中全部附带有反应停止液。使用时请添加反应液量的1/10,即可停止反应,进行电泳。
在室温保存时,SDS会出现沉淀,请于温水浴中将其溶解后使用。
 
■ 保存
开封后室温保存。